Quá trình thiết kế gen nhân tạo mã

Quá trình thiết kế gen nhân tạo mã hóa AGPase (Lan1_opt) diễn ra như sau:
Gen glgC của vi khuẩn E. coli (V000281.1, GenBank) được đột biến G336D, kết quả thay glycin bởi aspartic acid, ngoài ra, một số sai khác trong trình tự nucleotide được thiết kế nhằm phù hợp hơn với thực vật mà không ảnh hưởng đến quá trình dịch mã. Cấu trúc của gen sau khi đột biến G336D được gắn vào đầu 5’ một đoạn 171 bp mã hóa cho chuỗi peptide tín hiệu (gồm 57 amino acid) dẫn protein vào lục lạp có nguồn gốc từ gen rbcS mã hóa tiểu phần nhỏ của enzyme ribulose 1,5-bisphosphate carboxylase ở Arabidopsis, còn đầu 3’ được bổ sung đuôi c-myc (11 amino acid) và trình tự KDEL (4 amino aicd) với 48 bp giúp phát hiện protein tái tổ hợp thông qua phương pháp lai Western. Ngoài ra, vị trí nhận biết của enzyme giới hạn XbaI được thêm vào đầu 5’ và vị trí nhận biết SacI được thêm vào đầu 3’ của gen Lan1_opt để thuận tiện cho việc cắt và nối ghép gen trong quá trình thiết kế vector chuyển gen vào thực vật.

Kết quả (Anh) 1:

The design process of artificial genes encoding AGPase (Lan1_opt) takes place as follows:GlgC gene of e. coli bacteria (V 000281.1, GenBank) are G336D mutation, results instead of glycin by aspartic acid, in addition, a number of different nucleotide sequences designed to better fit the plant which does not affect the process of translation. The structure of the gene after mutation G336D is attached to the top of the 5 ' one paragraph 171-bp coding for signal peptide sequences (including 57 amino acid) protein leads to the chloroplast is derived from the gene encoding the small section of rbcS enzyme ribulose bisphosphate carboxylase-1.5 in Arabidopsis, also top 3 ' tail are additional c-myc (11 amino acids) and KDEL sequence (4 amino aicd) with 48 bp help detect protein reorganisation hybrid methods through Western. In addition, the location of XbaI restriction enzymes are added to the top of the 5 ' position and get to know the top 3 ' added SacI by gene Lan1_opt to facilitate the cut and connects to transplant genes in vector design process to transfer genes into plants.

Kết quả (Anh) 2:

The process of designing artificial gene encoding AGPase (Lan1_opt) goes as follows:
The gene of E. coli glgC (V000281.1, GenBank) was G336D mutation, results rather glycine by aspartic acid, in addition, a some differences in the nucleotide sequence is designed to fit over the plant without affecting the process of translation. The structure of the G336D mutation gene after being attached to the 5 '171 bp encoding a passage for the signal peptide (comprising 57 amino acid) proteins into chloroplasts lead-derived RBCs genes encoding subunits of the enzyme small bisphosphate carboxylase ribulose 1.5-in Arabidopsis, and the 3 'tail are additional c-myc (11 amino acids) and KDEL sequences (4 amino acid in) with 48 bp help detect recombinant proteins through hybrid approach Western. Besides,